小鼠cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)elisa檢測試劑盒?操作步驟
小鼠cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)elisa檢測試劑盒操作步驟：
1. 標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
240pg/ml 5號標(biāo)準品 150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
120pg/ml 4號標(biāo)準品 150μl的5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
60pg/ml 3號標(biāo)準品 150μl的4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
30pg/ml 2號標(biāo)準品 150μl的3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
15pg/ml 1號標(biāo)準品 150μl的2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于 酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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