綜合微生物的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
（1）前期準(zhǔn)備：（A）滅菌處理；（B）制備Biolite水；（C）檢查設(shè)備和材料；
（2）按比例配制培養(yǎng)材料；
（3）導(dǎo)入曝氣，進(jìn)行繁殖培養(yǎng)；
（4）取液觀察；（a）取液；（b）稀釋菌液；（c）平板培養(yǎng)；
（5）分離并檢測(cè)；
（6）取液儲(chǔ)存；通過該綜合微生物培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單可操作性強(qiáng)，培養(yǎng)的綜合微生物均在3代以內(nèi)，菌類穩(wěn)定不發(fā)生突變，且繁殖快速。
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規(guī)格參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
pETBlue-2 | pETBlue-2 | EY-J963287 |
資源名稱: pETBlue-2
種屬: pETBlue-2 plasmid
提供形式: 質(zhì)粒干粉
安全等級(jí): 1
模式菌株: no
應(yīng)用領(lǐng)域: 質(zhì)粒載體
培養(yǎng)基: 原核抗性：Amp； 克隆菌株：DH5α； 培養(yǎng)條件：37℃。LB培養(yǎng)基，含50μg/mL氨芐鈉。
存儲(chǔ)條件: 4℃避光保存；運(yùn)輸條件：常溫運(yùn)輸。
低溫存法:
①簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過1～2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3～4個(gè)月；②液氮超低溫保存法，將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內(nèi)，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí)，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法保存。
微生物菌種的培養(yǎng)：
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級(jí)種子，把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。
Trameshirsuta 中文名稱：粗毛栓菌Trameshirsuta分離基物:空氣提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0014;馬鈴薯、葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基:(PDA);馬鈴薯提取液1.0L，葡萄糖20.0g，瓊脂15.0g，pH自然。[注]馬鈴薯提取液生長(zhǎng)條件:25℃;好氧存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：97%
Alcaligenesfaecalis 中文名稱：糞產(chǎn)桿菌Alcaligenesfaecalis提供形式:凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:《GB4789.28培養(yǎng)基:和試劑的質(zhì)量要求》標(biāo)準(zhǔn)菌株。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002;營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂;蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，瓊脂15.0g，蒸餾1.0L，pH7.0。[注]培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mgMnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。生長(zhǎng)條件:37℃;存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：95%
Brachybacriumnesrenkovii 中文名稱：涅氏小短桿菌Brachybacriumnesrenkovii分離基物:牛奶提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:yes培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0033;LB培養(yǎng)基:(LBMedium);蛋白胨10.0g，酵母5.0g，NaCl10.0g，瓊脂15.0g，蒸餾1.0L，pH7.0。生長(zhǎng)條件:28℃;好氧存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：95%
Bradyrhizobiumelkanii 中文名稱：埃氏慢生根瘤菌Bradyrhizobiumelkanii分離基物:大豆提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:分類學(xué)研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0009;根瘤菌培養(yǎng)基:-1(Rhizobiummedium);酵母1.0g，10.0g，土壤提取液200ml，瓊脂15.0g，蒸餾800ml，pH7.2。土壤提取液生長(zhǎng)條件:30℃;好氧存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：98%
Bacilluseiseniae 中文名稱：蚯蚓芽胞桿菌Bacilluseiseniae分離基物:蚯蚓腸道提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:芽胞桿菌分類鑒定模式菌株:。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002;營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂;蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，瓊脂15.0g，蒸餾1.0L，pH7.0。[注]培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mgMnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。生長(zhǎng)條件:30℃;好氧存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：98%
Bacillusmycoides 中文名稱：蕈狀芽胞桿菌Bacillusmycoides提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:《GB4789.28培養(yǎng)基:和試劑的質(zhì)量要求》標(biāo)準(zhǔn)菌株。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002;營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂;蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl5.0g，瓊脂15.0g，蒸餾1.0L，pH7.0。[注]培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mgMnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。生長(zhǎng)條件:30℃;好氧存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法500 純度：98%
Enrococcusdurans(Streptococcusdurans) 中文名稱：耐久腸球菌(堅(jiān)韌鏈球菌)Enrococcusdurans(Streptococcusdurans)安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:116或114生長(zhǎng)條件:37℃ 純度：≥98%
Enrococcus cecorum 中文名稱：盲腸腸球菌Enrococcus cecorum分離基物:雞盲腸提供形式:凍干安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:哥倫比亞血平板生長(zhǎng)條件:37℃，5%CO2，24h，鏡檢為陽(yáng)性球菌。 純度：97%
pETBlue-2PALCAM Listeria selective-Supplement acc.to van Netten et al PALCAM人膀胱平滑肌細(xì)胞cDNA3-乙烯基苯AU1 tag peptide AU1 tag標(biāo)簽多肽
李斯特氏菌選擇添加劑人尿道上皮細(xì)胞cDNA3-乙烯基苯Glu-Glu Tag peptide Glu-Glu Tag多肽蛋白
L-PALCAM-Listeria selective enrichment broth( base) acc.van Netten et al. L-PALCAM 李斯特氏菌選擇富集肉湯（基礎(chǔ)）人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞cDNA3-乙烯基苯CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 環(huán)核苷陽(yáng)離子通道蛋白α2抗原
Peptone water( buffered) 緩沖蛋白胨水人前列腺上皮細(xì)胞cDNA鹽金剛乙胺CNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase) C型鈉尿肽抗原
Phenol-re broth( base) 酚紅肉湯（六亞）人前列腺成纖維細(xì)胞cDNA鹽金剛乙胺CNTF(Ciliary Neurotrophic Factor) 睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗原
Plate count agar Casein-peptone dextrose yeast extract agar人前列腺平滑肌細(xì)胞cDNA3-基苯factor V(Vcoagulation factor) 5抗體
平板計(jì)數(shù)瓊脂/酪蛋白右旋糖酵母瓊脂人顱骨造骨細(xì)胞cDNA3-基苯Collagen III (Anti-Collagen Type III ) 抗Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)
Plate count skim milk agar平板計(jì)數(shù)脫脂乳瓊脂人滑膜細(xì)胞cDNA3-基苯Collagen III (Anti--Collagen Type III ) Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)
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