實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；LoVo | 貼壁生長 | EY-X63324 |
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細(xì)胞名稱 結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；LoVo
形態(tài)特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞是1971年從診斷為結(jié)腸腺癌的56歲白人男性的一個(gè)左鎖骨上區(qū)的轉(zhuǎn)移灶建系的。癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb和fos的表達(dá)呈陽性；未檢測到sis和N-myc的表達(dá)。它在裸鼠中能成瘤；表達(dá)腫瘤特異的核基質(zhì)蛋白蛋白CC-3和CC-4。
培養(yǎng)條件: F12K10%FBS
傳代方法: 1:3~1:10傳代；2~3天換液1次。
傳代情況: C3
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
小鼠雜交瘤細(xì)胞；AFG20081C8形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-GAS6 Polyclonal Antibody
羥基纖維素（4000mpas）RECK (D8C7) Rabbit mAb2-氟磺酰
麥芽糖;淀粉糖Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb2-磺酰
ONX-0914 (PR-957)Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAb炔聯(lián)
N-壬?；?N-甲基葡萄糖(MEGA9)Flotillin-2 (C42A3) Rabbit mAb間異酸酯
甲基纖維素(100000mPa.s)AMPA Receptor 3 (GluA 3) Antibody2-(*硅基)
甲基纖維素(4000 mPa.s)Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb三鈉
對基-β-D-吡喃半糖苷(PNPG)Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAb2 , 二溴-5-甲基吡
D-核糖(標(biāo)準(zhǔn)品)Notch1 (C37C7) Rabbit mAb三氟磺酸銀
D-核糖Chk2 (1C12) Mouse mAb三氟肼鹽酸鹽
二硫蘇糖(DTT)Chk2 (1C12) Mouse mAb5-溴-2-氟
D(+)-松二糖Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (PE-Cy®7 Conjuga)氟肼鹽酸
D-果糖-1,6-二酸三鈉鹽GOT1 (E4A4O) Rabbit mAb2-氟-甲基-5-溴吡啶
海帶多糖；昆布糖 (來自褐藻類)S100A9 (D5O6O) Rabbit mAb (IHC Formulad)L-
(1:250)，粉Phospho-HDAC4 (Ser246)/HDAC5 (Ser259)/HDAC7 (Ser155) (D27B5) Rabbit mAb巰基酸甲酯
木瓜蛋白酶(800u/mg)Phospho-HDAC4 (Ser246)/HDAC5 (Ser259)/HDAC7 (Ser155) (D27B5) Rabbit mAb2-氨基-5-甲酸
木瓜蛋白酶(2000u/mg)HA-Tag (6E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-
(1:2500)GST (26H1) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,二甲
(1:4500)Notch3 (8G5) Rat mAb2-巰基-5-甲基-1,3,噻二唑
態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-SERPINB5 Polyclonal Antibody
雜交瘤細(xì)胞；AC-G10形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-β-Tubulin Polyclonal Antibody
雜交瘤細(xì)胞；AC-H12形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-TLR3 Polyclonal Antibody
雜交瘤細(xì)胞；WXR形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 半貼壁生長Anti-PRKAA1 Polyclonal Antibody
結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；LoVo大鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)ELISA試劑盒ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠同型半胱氨(Hcy)ELISA試劑盒EM-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠αS轉(zhuǎn)移酶(α-GST)ELISA試劑盒EMAbELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠C型鈉尿肽(P)ELISA試劑盒EMAbELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)ELISA試劑盒EMAbELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠(HYD)ELISA試劑盒EMAbELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠(Pepsin)ELISA試劑盒EMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)ELISA試劑盒EMAIgAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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