細(xì)胞名稱 十二脂腸腺癌；HuTu-80
形態(tài)特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 每個細(xì)胞上蛙皮素受體的位點多達(dá)6000個。
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS；1%NEAA
傳代方法: 1:2～1:5傳代；2～3天換液1次。
傳代情況: P143
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
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產(chǎn)品名稱 | 十二脂腸腺癌；HuTu-80 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63307 |
產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。
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鏈霉親和素Phospho-c-Cbl (Tyr774) Antibody(2R,4S)-羥基吡咯烷-2-羧酸
西他沙星Phospho-RSK2 (Ser227) (D53A11) Rabbit mAb甲酸甲酯
DHBS；3,5-二-2-羥基磺酸鈉TGM2 (D11A6) XP® Rabbit mAb-甲
NBD-PZ；硝基-7-哌并氧雜噁二唑TGM2 (D11A6) XP® Rabbit mAbL-甲酯鹽酸鹽
BGP；β-甘油酸鈉水合物(高純)LDHA/LDHC (C28H7) Rabbit mAb6-甲基吲哚
Fura 2-AM;鈣熒光探針Progesrone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)三水六氟酮
NBD-F；氟-7-硝基-2,1,并氧雜惡二唑CCT2 Antibody溴噻唑
魯米諾,發(fā)光氨Acetyl-α-Tubulin (Lys40) (D20G3) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氨基-甲基-5-溴吡啶
Leu-pNA；L--CRMP-2 (D8L6V) Rabbit mAb2-噻吩
BAEE;N-甲?；?L-酯鹽酸鹽SOAT1 Antibody甲基嘧啶
TAME.HCl；NA-P-甲磺基-L-甲酯鹽酸鹽CD34 (ICO115) Mouse mAb溴五氟
AE；N-酰-L-酯CD44 (156-3C11) Mouse mAb2-氟二酸二甲酯
DAPI；4，’6-二脒基-2-基吲哚CD44 (156-3C11) Mouse mAb2-氨基-5-硝基-2'-氟二甲酮
基-α-D-吡喃半糖苷CD109 Antibody2-氨基-6-(三氟甲基)吡啶
ABTS;2,2'-聯(lián)氨-雙（基并噻唑啉-6-磺酸）二鹽Phospho-CD19 (Tyr531) Antibody5--2-氟
β-D-葡糖糖-6-酸鈉鹽Phospho-CD19 (Tyr531) Antibody6-甲氧基-2-萘甲
HEPBS；N-(2-羥基)哌-N'-(丁磺酸）PTMScan® Peptide Purification Kit鄰氟芐
赫斯特?zé)晒馊剂?3258CD19 Antibody鹽酸洛哌丁
赫斯特?zé)晒馊剂?3342NCAM (CD56) (123C3) Mouse mAb4,4'-二偶酰
Fluo-3 AM;鈣熒光探針CD44 AntibodyN-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸 1-叔丁酯
Indo 1-AM;鈣熒光探針Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb3,6-二-4,5-二甲基噠
Fluo AM;鈣熒光探針Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb5-羥基吡-2-羧酸
120；7-氨基-甲基(AMC)Nanog Antibody5-溴-1-戊
Duvelisib (IPI-145)Phospho-LAT (Tyr171) Antibody5-羥基-1-茚酮
間甲酸;間甲酸LDHA (C4B5) Rabbit mAb6-氨基-1,2,3,四氫-1-萘酮
5-溴--3吲哚神經(jīng)氨酸鈉鹽LDHA (C4B5) Rabbit mAb1-芐基-甲基-哌啶酮
ABEI；N-（氨丁基）-N-基異魯米諾Phospho-Tau (Ser404) (D2Z4G) Rabbit mAb (IHC preferred)5-溴異喹啉
TTAC；十四烷基*基化銨Phospho-LAT (Tyr191) Antibody6-溴異喹啉
DTAC；十二烷基*基化銨Phospho-LAT (Tyr191) Antibody叔丁基磺酰
十四烷基*基(TTAB)PDE5 (P434) Antibody氟-2-羥基甲
十二烷基*基eEF1A (D10A5) Rabbit mAb1-溴-2,二氟
CTAB；十六烷基*基LCP1 (D1C3) Rabbit mAb-氟酚
CTAC;十六烷基*基化銨RCC1 Antibody-2-氟酚
十八烷基*基化銨Phospho-Rb (Ser780) (C84F6) Rabbit mAb溴-7-氮雜吲哚
STAB；十八烷基*基Phospho-eIF4B (Ser422) Antibody溴-硝基三氟甲
十烷基*基Phospho-eIF4B (Ser422) Antibody2,二氟吡啶
十二脂腸腺癌；HuTu-80大鼠半胱氨蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒CXCL16ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒CXCL16ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠骨特異性性磷酶B(ALP-B)ELISA試劑盒CXCL16ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠骨橋素(OPN)ELISA試劑盒CXCR1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒CXCR3ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA試劑盒CXCR3ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒CXCR3ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒CxELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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