實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
肝細(xì)胞；HL-7702[L-02] | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63485 |
?
細(xì)胞名稱 肝細(xì)胞；HL-7702[L-02]
形態(tài)特性: 上皮樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性:
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，20%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況: PN5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
rmJAM-B/Fc, CF (50 UG)細(xì)胞名稱:
2-氟-1,二甲基化咪唑翁六氟酸酯(DFIH) PARN (A42) Antibody嘧啶酮
肥胖抑制素(大鼠) Snail (L70G2) Mouse mAb2-氨基惡唑
芐索銨 Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF)對(duì)甲氧基酸
β-淀粉樣蛋白(1-42),大鼠PARN (P620) Antibody姜黃素
血管緊張素IPTMScan® Lys-C Proase溴-氟甲
血管緊張素IIIRabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control對(duì)氟酰
蜂毒明肽; 蜂針液明肽Phospho-Bcr (Tyr177) Antibody對(duì)氟
枸櫞酸米芬,克羅米芬Bcr Antibody5-甲基-1-茚酮
ML-176;SR-3335Acetyl-Histone H3 (Lys27) (D5E4) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-溴嘧啶
Semaxanib(SU-5416 )VCAM-1 (D8U5V) Rabbit mAb (Mouse Specific)嘧啶-5-羧酸
米爾貝肟Gα(z) Antibody對(duì)氟甲
2-巰基吡啶-N-氧化物 鋅鹽;吡啶硫酮鋅,吡硫鋅GAPDH (14C10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)對(duì)氟甲
伐地考昔GAPDH (14C10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)氨基-2-甲酸甲酯
胃膜素,胃粘蛋白,人胃泌素Bcr-Abl (b2a2 Junction Specific) (L99H4) Mouse mAb氨基-溴甲酸甲酯
UDPGA Na；尿苷-5'-二酸葡糖酸三鈉鹽MCP-1 Antibody (Carboxy-rminal Antigen)羥甲基哌啶
,二鈉UTF1 Antibody1,二酸
(標(biāo)準(zhǔn)品)Tropomyosin-1 (D12H4) Rabbit mAb6-氮雜脲嘧啶
RGD肽Phospho-p56Dok-2 (Tyr351) Antibody5-氟-鄰二甲
肝素鋰Mouse Inrferon-γ (mIFN-γ)氟
促胰液素;胰泌素p62Dok Antibody二氧烷
Tropomyosin-1/3 (D17B8) Rabbit mAb1,二甲基-哌啶酮
普拉洛芬Olfm4 (D6Y5A) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)亞硝酸正戊酯
普拉洛芬(標(biāo)準(zhǔn)品)Olfm4 (D6Y5A) XP® Rabbit mAb (Mouse Specific)亞麻酸
牛血清白蛋白(BSA);牛血清白蛋白組分五p56Dok-2 Antibody對(duì)酰
萘啶酮酸；CD45 (HI30) Mouse mAb (redFluor™ 710 Conjuga)氧甲酰-哌酮 鹽酸鹽
糖原,α-1,6 葡聚糖,糖元DDR1 Antibody5-羧基噻吩-2-酸
溴化錠(EB)PhosphoPlus® mTOR (Ser2448) Antibody Duet5-溴-1-甲基-1H-吲唑
貝西沙星鹽酸鹽Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1135) (DA7A8) Rabbit mAb2,6-二羥基-甲基吡啶
甜菜（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1135) (DA7A8) Rabbit mAb溴-2-三氟甲
甜菜Phospho-PSD95 (Tyr236/Tyr240) Antibody5-溴靛紅酸酐
尿酸Bag1 (3.10G3E2) Mouse mAb5-溴噻吩-2-甲
尿酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-AMPA Receptor 2 (GluA2) (Tyr869/Tyr873/Tyr876) Antibody鄰二甲酰
Phospho-AMPA Receptor 2 (GluA2) (Tyr869/Tyr873/Tyr876) AntibodyN-甲基-基
甜菜，一水Mcl-1 (D5V5L) Rabbit mAb吡啶-2,6-二羧酸
萘酚AS-D-酸酯SATB2 (E8R8H) Rabbit mAb2,9-二甲基-4,7-聯(lián)-1,10-鄰二氮雜菲
硫酸甲酯IGFBP2 Antibody3,6-二羥基鄰二甲
u/ml試劑胰島素
rmIL-7, CF (5 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；4E-BP1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-7, CF (25 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；ABL2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-7 Ra/Fc, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；Akt2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-7 (5 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；Akt3 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-7 (25 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；AMACR RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
肝細(xì)胞；HL-7702[L-02]人結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒MTELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人TH糖蛋白(THP)ELISA試劑盒MTFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒MTLELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA試劑盒MTLELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人紅細(xì)胞膜蛋白(EMP)ELISA試劑盒MTLELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA試劑盒mTORELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗IgA抗體(anti-IgA-Ab)ELISA試劑盒MTXELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)ELISA試劑盒MUC5ACELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
點(diǎn)擊放大
會(huì)員_a.png)