實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學(xué)研究，作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
小鼠肝癌細胞；Hepa1-6[Hepa1-6] | 貼壁生長 | EY-X63282 |
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細胞名稱 小鼠肝癌細胞；Hepa1-6[Hepa1-6]
形態(tài)特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 此細胞株源自C57/L小鼠中引發(fā)的BW7756肝癌；表達AFP、α1抗、；鼠痘病毒陰性。此細胞可以在無血清的培養(yǎng)基中繁殖，培養(yǎng)基成分是：DMEM,75%;Waymouth'sMAB87/3培養(yǎng)基，25%。添加3x10-8M硒。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代；3~4天1次。
傳代情況: P54
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
小鼠雜交瘤細胞；HBBADCPPF1-4C形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長羊抗人IgM（免疫血清）
小鼠雜交瘤細胞；HB5F12AD3形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長羊抗人IgG-RBITC
人神經(jīng)母細胞瘤細胞；SH-SY5Y形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長、懸浮生長均有羊抗（免疫血清）
小鼠雜交瘤細胞；HBGAL30.19形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長膠體金標記羊抗大鼠IgG
小鼠雜交瘤細胞；HBLucky1C形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長兔抗猴IgG（免疫血清）
人膀胱癌細胞；H/RB-CL2形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長羊抗雞IgG-RBITC
小鼠雜交瘤細胞；HB28205形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長兔抗猴IgG–FITC
人膀胱癌細胞；H/RB-M形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長化羊抗人IgM
人胚腎上皮細胞系；KiMA形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長羊抗人IgA–FITC
人胚肺細胞系；KuMA形態(tài)特性: 成纖維細胞樣生長特性: 貼壁生長Anti-GAPDH Polyclonal Antibody
人神經(jīng)瘤細胞；751-NA形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長羊抗–FITC
大鼠纖維母細胞；1/EJ1-1形態(tài)特性: 多形細胞樣生長特性: 貼壁生長羊抗馬IgG–FITC
人胰腺細胞系；HPC-Y5形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長化羊抗人IgA
小鼠雜交瘤細胞系；HSNAC形態(tài)特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長膠體金標記兔抗雞IgG
中國倉鼠卵巢細胞（亞系克?。?；CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2cDNA-TGF-βDindingProteincDNA形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長Goat Anti-Mouse IgM antibody
中國倉鼠卵巢細胞（亞系克?。?；CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1cDNA形態(tài)特性: 上皮細胞樣生長特性: 貼壁生長兔抗猴IgG-RBITC
小鼠肝癌細胞；Hepa1-6[Hepa1-6]小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒CaM-abELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒CAMELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠端粒酶(TE)ELISA試劑盒CAMELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒CAMELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒CAMK2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒cAMPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒cAMPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒cAMPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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