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產(chǎn)品名稱(chēng) | 肺細(xì)胞；HLF-a |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
貨號(hào) | EY-X63463 |
細(xì)胞名稱(chēng) 肺細(xì)胞；HLF-a
形態(tài)特性: 上皮樣細(xì)胞
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性:
培養(yǎng)條件:
傳代方法:
傳代情況: P86
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 培養(yǎng)法（-）
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產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線(xiàn) 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。
2-脫氧-D-葡萄糖CTMP Antibody銀
坎地沙坦MPC2 (D4I7G) Rabbit mAb扎西他濱
Ruxolitinib(INCB018424) phosphaMAML2 Antibody1,5-二羥基萘
SB1317,TG02Sox9 (D8G8H) Rabbit mAb (PE Conjuga)芐氧基
阿齊沙坦Phospho-TrkA (Tyr490)/TrkB (Tyr516) (C35G9) Rabbit mAb維生素 B2
阿齊沙坦(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-TrkA (Tyr490)/TrkB (Tyr516) (C35G9) Rabbit mAbN-Boc-氨基基溴
伊維菌素(標(biāo)準(zhǔn)品)Histone H3 (D2B12) XP® Rabbit mAb (ChIP Formulad)溴-2-氟
SB431542,SB-431542Phospho-TrkA (Tyr674/675)/TrkB (Tyr706/707) (C50F3) Rabbit mAb異丁基酸
米拉貝隆Phospho-TrkA (Tyr674/675)/TrkB (Tyr706/707) (C50F3) Rabbit mAb6-氟-哌啶-基-1,2-并異唑鹽酸鹽
去氧紫草素(標(biāo)準(zhǔn)品)CD3 (UCHT1) Mouse mAb (PE Conjuga)2--5-氟甲
Tariquidar,XR-9576Exportin-1/CRM1 (D6V7N) Rabbit mAb2--氟甲
鈦黃;達(dá)旦黃；鈦鎳黃A20/TNFAIP3 Antibody1-Boc-哌啶甲酸
雙水楊酯;水楊酸-2-羧基酯β-Canin (L54E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-溴-5-甲
雙水楊酯 ;水楊酸-2-羧基酯Tri-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D5A7) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)-2-溴甲
鹽酸魯拉西酮TBC1D1 (V796) Antibody2,5-二氟吡啶
鹽酸魯拉西酮(標(biāo)準(zhǔn)品)IL-2Rβ (D4X3H) Rabbit mAb對(duì)氨基酸鹽酸鹽89415-40
櫻黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (12F8) Rabbit mAb吡啶-2,二
香橙素(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (12F8) Rabbit mAb1-甲基-1H-吡唑-5-酸頻哪酯
3',4',7-三羥基黃酮(標(biāo)準(zhǔn)品)GADD45 alpha (D17E8) Rabbit mAb(-)-二異松蒎基烷
N-甲基-D-葡糖;葡RBAP46/RBAP48 Antibody羧基-2-酸
溴丁酸甲酯Phospho-ULK1 (Ser467) Antibody-5-三氟甲基吡啶
地克珠利Phospho-ULK1 (Ser467) Antibody2,5-二酸
美他環(huán)素,甲(標(biāo)準(zhǔn)品)Mouse Heart Tissue Control Extracts四氫化鄰二甲酸酐
美他環(huán)素,甲鹽酸鹽MAD2L1 (D8A7) Rabbit mAb氟-甲氧基酸
己二酸二酰肼Cavin-1 (D8C1D) Rabbit mAb鄰甲酰甲酸
化酰膽(標(biāo)準(zhǔn)品)Anti-Blue (2D2F11) Mouse mAb (HRP Conjuga)替莫唑
化酰膽TrkA and TrkB Antibody Sampler Kit芴甲氧羰基-L-天冬氨酸 芐酯
alpha-亞麻酸(標(biāo)準(zhǔn)品)YY1 (D5D9Z) Rabbit mAb羥基吡咯烷鹽酸鹽
MQAE(離子熒光探針)KSR1 Antibody(S)-(+)-羥基四
特立氟SimpleChIP® Oct-4 Promor Primers(R)-(-)-羥基四
當(dāng)歸?；昝仔罤(標(biāo)準(zhǔn)品)AIF Antibody側(cè)鏈酸
美曲勃龍(R-1881)Rab5 (E6N8S) Mouse mAb
α-Smooth Muscle Actin (1A4) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)
(+)松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)HSP70 (D1M6J) Mouse mAb7--6-氟-1-環(huán)基-1,二氫-氧-喹啉羧酸
磺隆Autophagy Induction (ULK1 Complex) Antibody Sampler Kit2,二-5-氟甲酰
L-墨蝶呤DHX29 (G63) Antibody2-噻噸酮
鄰氟酮SimpleChIP® Sox2 Promor Primers2,6-二-三氟肼
莫特塞尼Vinculin Antibody2--(三氟甲基)肼
金松雙黃酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Vinculin Antibody椰油酰基甜菜
10-羥基癸酸,10-HDA(標(biāo)準(zhǔn)品)Rac1/Cdc42 Antibody2,二甲氧基甲
艾力替尼甲磺酸鹽(AST1306)Rac1/Cdc42 Antibody甲
肺細(xì)胞；HLF-a人B細(xì)胞受體(BCR)ELISA試劑盒MAPKELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人絲氨/蘇氨蛋白磷酶(STK)ELISA試劑盒MATELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人超抗原(Sag)ELISA試劑盒MAU/ALBELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人脂多糖/內(nèi)素(LPS)ELISA試劑盒MBLRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人非甲基化寡核苷(NON)ELISA試劑盒MBP/MBLELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA試劑盒MBPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人甲酰甲硫氨(fMet)ELISA試劑盒MBPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人絲氨蛋白酶(PRSS)ELISA試劑盒MBPELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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