公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
肝癌細(xì)胞；HepG2[HepG2] | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63237 |
細(xì)胞名稱(chēng) 肝癌細(xì)胞；HepG2[HepG2]
形態(tài)特性: 上皮樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞來(lái)源于一名15歲的白人少年的肝癌組織。該細(xì)胞表達(dá)甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、結(jié)合珠蛋白、銅藍(lán)蛋白、纖溶酶原、補(bǔ)體C4、C3激活物、纖維蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、結(jié)合蛋白；表達(dá)胰島素受體和胰島素樣生長(zhǎng)因子IGFⅡ的受體；該細(xì)胞具有3-羥基-3-甲酰還原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未證明該細(xì)胞中有HBV基因組。
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS；1%NEAA
傳代方法: 1:4~1：6傳代；每周2次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 培養(yǎng)法（-）
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
蟾蜍他靈;和蟾毒他靈(標(biāo)準(zhǔn)品)DKK1 (D5V6L) Rabbit mAb2,二硝基
蟾毒它靈(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-MARK Family (Activation Loop) Antibody2-甲氧基-
黃尿酸RecQL1 (Q1N3) Mouse mAb衣康酸
舒巴坦酸JAKMIP1 Antibody甲基酸丁酯
舒巴坦酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Cox1 Antibody二二甲基酸酯
沙蟾毒精(標(biāo)準(zhǔn)品)Cox2 Antibody溴異惡唑
坦西莫司,脂化物Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjuga)三基
聯(lián)雙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)COX IV Antibody2-基-1-丁
聯(lián)雙酯RANK Antibody2-基丁
富馬酸盧帕他定DOCK180 (C4C12) Rabbit mAb糠
富馬酸盧帕他定(標(biāo)準(zhǔn)品)Mre11 (31H4) Rabbit mAb2-噻吩甲
正辛基*基,八烷基*基Mre11 (31H4) Rabbit mAb叔丁基
酮麝香(標(biāo)準(zhǔn)品)DNMT3B (E4I4O) Rabbit mAb (Mouse Specific)6-甲氧基-1H-吲哚-2-羧酸甲酯
甲?；宙?PKC-412)N-WASP (30D10) Rabbit mAb基三硅烷
無(wú)水鄰菲啰啉；1,10-菲羅啉N-WASP (30D10) Rabbit mAbN-Boc-2-哌啶甲酸
鄰菲啰啉一水；1,10-菲羅啉一水COX IV (3E11) Rabbit mAb間硝基三氟甲
鄰菲啰啉鹽酸鹽一水；1,10-菲羅啉鹽酸鹽COX IV (3E11) Rabbit mAb防染鹽S
EDTA二鈉, 二四酸二鈉鹽
肝癌細(xì)胞；HepG2[HepG2]小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒ALV-AGELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PA)ELISA試劑盒AMAC-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠甲基化酶(Methylase)ELISA試劑盒AmAC-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠組織蛋白去乙?；?HD)ELISA試劑盒AmAC-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒AMAC-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠過(guò)敏素/補(bǔ)體片斷4a(C4a)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
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